Patógenos transmitidos por los alimentos: Detección múltiple

Sin títuloEl análisis habitual de la calidad microbiológica en muestras de alimentos requiere en algunos casos una incubación previa inicial en un medio de enriquecimiento. Esto es necesario con el fin de garantizar que las pequeñas cantidades de las cepas patógenas puedan ser detectadas. En este artículo, firmado en primer lugar por Germán Villamizar-Rodríguez, de la Universidad de Oviedo, los autores del trabajo, dan a conocer el desarrollo de un medio de pre-enriquecimiento universal, que sirve para el crecimiento simultáneo de Bacillus cereus, Campylobacter jejuni, Clostridium perfringens, Cronobacter sakazakii, Escherichia coli, la familia Enterobacteriaceae (38 especies, 27 géneros), Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, y Salmonella spp. (dos especies, 13 cepas).

En todos los casos y para todas las especies se logró excelente crecimiento en el medio enriquecido. Esto fue confirmado por siembras en el correspondiente medio de agar selectivo para cada bacteria. Este medio de pre-enriquecimiento universal (GVUM) podría ser útil en los análisis microbiológicos de alimentos, donde las diferentes bacterias patógenas deben ser detectadas después de una etapa de pre-enriquecimiento.

Sin títuloDespués, se desarrolló una reacción mPCR para la detección de todos estos patógenos, después de diseñar un conjunto de nueve pares de oligonucleótidos de dianas génicas específicas sobre gDNA de cada una de estas bacterias, que abarca todas las cepas disponibles ya secuenciados en GenBank para cada tipo de patógenos. Los límites de detección fueron de 1genoma equivalente (GE), con la excepción de la familia de las Enterobacterias (5 GEs)

Los investigadores obtuvieron la amplificación de todas las dianas (de 70 a 251 pb, dependiendo del tipo de bacteria), mostrando la capacidad del método para detectar las bacterias más importantes transmitidas por los alimentos industriales a partir de un medio de pre-enriquecimiento universal. Este método incluyó un paso inicial de pre-enriquecimiento (18 h), seguido de un mPCR (2 h) y una electroforesis capilar (30 min); evitando la tediosa y larga duración necesaria para el crecimiento con los medios sólidos convencionales requeridos en los análisis tradicionales (1-4 días, dependiendo del agente patógeno específico y procedimiento de verificación)

Sin títuloUna prueba externa de este método se llevó a cabo con el fin de comparar los métodos clásicos y mPCR. Esta evaluación se llevó a cabo en cinco tipos de matrices de alimentos (carne, productos lácteos, alimentos preparados, conservas de pescado y productos de pastelería), que fueron contaminados artificialmente con cada uno de los microorganismos, demostrando la equivalencia entre ambos métodos en los que los tanto por ciento de coincidencia oscilaron entre el 78 y 92%).

Este trabajo tiene la siguiente patente: (PCT/ES2014/000162).
Villamizar-Rodríguez G, et al. Multiplex detection of nine food-borne pathogens by mPCR and capillary electrophoresis after using a universal pre-enrichment medium. Front Microbiol 2015; 6: 1194.

http://journal.frontiersin.org/article/10.3389/fmicb.2015.01194/full