Rabia y PCR

Test LN34 para el diagnóstico post-morten de la rabia

9unoLa rabia es una enfermedad zoonótica mortal (alrededor de 50 000 muertos al año en todo el mundo) que requiere un diagnóstico rápido y exacto para prevenir la enfermedad en un individuo expuesto. El patrón estándar actual para el diagnóstico post-mortem de la rabia humana y animal es la prueba de anticuerpos fluorescentes directos (DFA).

Si bien la prueba de DFA ha demostrado ser sensible y confiable, requiere conjugados de anticuerpos de alta calidad, un técnico capacitado, un microscopio de fluorescencia y una muestra de diagnóstico de suficiente calidad.

Crystal M. Gigante (Poxvirus and Rabies Branch, Division of High Consequence Pathogens and Pathology, National Center for Emerging and Zoonotic Infectious Diseases, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, Georgia), y otro grupo de autores, han dado a conocer en la revista científica PLoS ONE una técnica de RT-PCR para el diagnóstico de la rabia post-morten.

9dosLa prueba, LN34 pan-lyssavirus, representa un buen candidato para el diagnóstico post-mortem de rabia debido a su capacidad para detectar ARN del género de Lyssavirus, su alta sensibilidad, su potencial para uso con tejidos deteriorados, su simple diseño y facilidad de llevar de llevarla a cabo.

En el trabajo, los investigadores presentan los datos de una evaluación del ensayo LN34 en 14 laboratorios. Se probaron un total de 2 978 muestras (1 049 DFA positivas) de África, América, Asia, Europa y Medio Oriente. El ensayo LN34 mostró baja variabilidad en los estudios de repetición y reproducibilidad y fue capaz de detectar ARN vírico en tejido cerebral fresco, congelado, archivado, deteriorado y fijado con formalina.

El ensayo LN34 mostró una alta especificidad diagnóstica (99,68%) y sensibilidad (99,90%) en comparación con la prueba DFA, y ninguna muestra positiva para DFA fue negativa con el ensayo LN34.

 

9tresEl test LN34 produjo hallazgos definitivos para 80 muestras que no fueron concluyentes o no demostrables por DFA, 29 fueron positivos. Cinco muestras no fueron concluyentes por el ensayo LN34, y solo una muestra no fue concluyente en ambas pruebas. El uso del ensayo LN34 condujo a la identificación de resultados de DFA falsos negativos y 11 falsos positivos. En conjunto, estos resultados demuestran la fiabilidad y la solidez del test LN34 y respaldan el papel de la prueba para mejorar el diagnóstico y la vigilancia de la rabia.

La evaluación internacional reveló la solidez, baja variabilidad y excelente especificidad diagnóstica y sensibilidad del ensayo LN34. En conjunto, los datos del estudio proporcionan pruebas de que el test LN34 es una prueba confiable para la identificación del ARN de lyssavirus en el tejido cerebral. Aún más, el ensayo LN34 jugó un papel más allá de la confirmación de los resultados de las pruebas DFA en varios casos. Los resultados discordantes entre el ensayo LN34 y DFA ayudaron a identificar problemas sistémicos en algunos laboratorios. Dos laboratorios identificaron una probable contaminación durante la preparación de la muestra y han reevaluado sus protocolos para evitar la contaminación cruzada en el futuro.

 

9cuatroLos resultados del ensayo LN34 identificaron una tendencia en los resultados DFA falsos positivos en un laboratorio, que probablemente habría pasado inadvertidos si no se hubieran realizado las pruebas LN34. En conjunto, las observaciones sugieren un papel importante de la prueba LN34 para mejorar el diagnóstico habitual de rabia animal como una prueba primaria de diagnóstico post mortem, especialmente para muestras no aptas para DFA y en áreas donde las pruebas DFA no son prácticas debido a las malas opciones de almacenamiento de muestras.

 

Gigante CM, et al. Multi-site evaluation of the LN34 pan-lyssavirus real-time RT-PCR assay for post-mortem rabies diagnostics. PLoS ONE 2018; 13(5): e0197074. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197074

https://www.cdc.gov/media/releases/2018/p0516-rapid-rabies-test.html