Virus Usutu en donantes de Austria

376(1)El virus Usutu (USUV), identificado por primera vez en Sudáfrica en 1959, es un arbovirus zoonótico emergente patógeno para animales y humanos con similitud ecológica con otros arbovirus como el Virus del Nilo Occidental (NWV). USUV es un flavivirus perteneciente al complejo japonés de encefalitis. Es transmitido principalmente por mosquitos de la familia Culex, sobre todo por Culex pipiens. Se ha informado de su presencia en varios países africanos incluyendo Senegal, República Centroafricana, Nigeria, Uganda, Burkina Faso, Costa de Marfil y Marruecos.

El virus fue identificado por primera vez fuera de África en 2001, en Austria, donde causó una mortalidad significativa entre las aves, principalmente de mirlos del Viejo Mundo (Turdus merula) en la ciudad de Viena.

El virus estuvo activo en la parte oriental de Austria hasta 2005, matando también a otros pájaros cantores. Durante los 10 años posteriores, no se observó en el país ninguna mortalidad asociada al virus, al contrario que en Hungría. El año pasado, el virus Usutu fue identificado nuevamente en dos mirlos, y en 2017 ya estaba en dieciséis tipos de pájaros cantores. Más preocupante, es que en otro estudio, el virus de Usutu se detectó en siete donaciones de sangre humana al este de Austria.376(2)

En 2014, la Cruz Roja Austríaca, Servicio de Sangre para Viena, Baja Austria y Burgenland, inició un examen regular para la posible detección del virus del Nilo Occidental (WNV) mediante una prueba de ácido nucleico (NAT) en toda la sangre donada entre el 1 de junio y el 30 de noviembre de cada año, encontrándose desde entonces muestras positivas todos los años. En 2017, se identificaron varias muestras positivas, lo que llevó a los autores de un estudio recogido en Eurosurveillance, firmado en primer lugar por Tamás Bakonyi (Viral Zoonoses, Emerging and Vector-Borne Infectious Group, Institute of Virology University of Veterinary Medicine, Vienne), con la colaboración de 7 autores más, de Austria, Hungría y Arabia Saudita, a realizar análisis moleculares más detallados de las muestras.

Las muestras de sangre de todas las donaciones recolectadas a partir del 1 de junio por el Servicio de Sangre para Viena, Baja Austria y Burgenland de la Cruz Roja Austriaca durante la temporada de transmisión del WNV 2017 fueron enviadas a la Cruz Roja Alemana, al Servicio de Sangre para Baden-Württemberg-Hessen en Frankfurt, donde se examinaron en mini-lotes de 19 muestras utilizando la prueba automatizada basada en ácidos nucleicos (NAT) con el sistema Cobas 8800® de Laboratorios Roche (ensayo WNV).

Un total de siete muestras de 12 047 donaciones de sangre recolectadas entre el 24 de julio y el 25 de agosto de 2017 reaccionaron positivamente. Las muestras positivas se evaluaron posteriormente en el Laboratorio Nacional de Referencia de Austria para las Infecciones por Arbovirus, el Centro de Virología de la Universidad Médica de Viena, y en el Instituto de Virología de la Universidad de Medicina Veterinaria de Viena. Se notificó los donantes de sangre del WNV NAT-positivos y se obtuvo información demográfica y epidemiológica relevante de ellos. Las muestras positivas de detección de NAT del WNV se volvieron a probar mediante ensayos específicos de RT y RT-qPCR del virus de Usutu (USUV), así como mediante pruebas de RT-PCR convencionales capaces de amplificar una amplia gama de flavivirus.

376(3)Si bien se confirmó que una donación de sangre contenía ácido nucleico de WNV, las otras seis fueron negativas por RT-qPCR específica para WNV pero positivas por RT-qPCR específica de USUV. Análisis retrospectivos de cuatro donantes de sangre diagnosticados como infectados por WNV en 2016, entre 70 864 probados durante el 1 de junio al 30 de noviembre, mostraron una muestra positiva de USUV. No se encontró ninguna donación de sangre con ácido nucleico USUV entre un total de 74 677 donaciones probadas en 2015.

Los siete donantes positivos para USUV tenían entre 20 y 60 años de edad, seis hombres y una mujer, todos de los estados federales austríacos de Viena, Baja Austria y Burgenland. Seis de ellos pudieron ser entrevistados, y solo uno informó de una estancia temporal en el extranjero (Sicilia) una a dos semanas antes de la donación de sangre. Ninguno de los donantes informó síntomas clínicos, ni en las cuatro semanas anteriores ni en controles posteriores después de la donación de sangre. También el donante confirmado por el WNV en 2017 fue asintomático y había adquirido la infección en la Baja Austria.

A partir de la primera muestra de sangre positiva para NAT en 2017, se estableció la secuencia de codificación completa del virus mediante la secuenciación de Sanger de los productos de amplificación y la compilación de las secuencias parciales. De las otras muestras positivas de 2017 y del ácido nucleico USUV del único donante de sangre de 2016 se generaron secuencias parciales dentro de la región NS5-3’UTR y otra región dentro del gen NS5. Los árboles filogenéticos se establecieron con el programa de análisis de genética evolutiva molecular (MEGA), para secuencias de codificación completas, así como para secuencias NS5-3’UTR. En ambos análisis filogenéticos, todas las secuencias derivadas de donantes de sangre de Austria se agrupan dentro del linaje genético “Europa 2” de USUV. Están estrechamente relacionados entre sí y con virus italianos derivados de aves y humanos de 2009 y 2010, incluida la cepa Bolonia 2009, y con virus recientes de 2016 derivados de aves de Austria y Hungría.

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La aparición del virus Usutu en Europa se remonta al menos a 1996, cuando se observó un episodio de mortalidad de aves silvestres en la región Toscana de Italia. Posteriormente se encontró también asociado a mortalidad en aves en varios países europeos. En 2016, la actividad general de USUV se informó en aves silvestres en Bélgica, Francia, Alemania y los Países Bajos, así como en Austria (en la misma área que 2001-2006) y en Hungría. En humanos solo se han notificado dos aislamientos USUV en África: uno en 1981 de un enfermo con fiebre y erupción en la República Centroafricana y el otro en 2004 de un niño con fiebre e ictericia en Burkina Faso.

En Austria, las investigaciones en áreas endémicas de la USUV en el sur de Viena durante agosto y septiembre de 2003, cuando el virus fue activo en aves silvestres, revelaron ácido nucleico específico de USUV en la sangre de un hombre joven con eritema entre 54 de 208 personas evaluadas con anticuerpos neutralizantes de USUV.
En 2009, se detectó ácido nucleico USUV en dos personas inmunocomprometidas en Italia, una enferma con linfoma de células B que desarrolló meningoencefalitis, y otro enfermo con enfermedad neurológica tras recibir un trasplante ortotópico de hígado.

En años posteriores, los anticuerpos específicos de USUV se detectaron en donantes sanos de sangre, así como en enfermos con síntomas neurológicos, en Italia, Alemania y Croacia. La detección entre 13 023 donaciones de sangre del Hospital Universitario Aachen, Alemania, en 2016, durante la epidemia generalizada de USUV en aves en Europa occidental y central, reveló una muestra de flavivirus-ARN positiva con la prueba Cobas TaqScreen-WNV®, que se identificó como USUV . En un estudio realizado entre 2008 y 2011 en la región de Módena de Italia, en el que participaron 915 enfermos con o sin alteraciones neurológicas, el porcentaje de ARN de USUV y muestras positivas de anticuerpos fue significativamente mayor que el del WNV, lo que plantea el problema en el potencial de USUV para causar enfermedad neuroinvasora humana.

Los análisis filogenéticos han demostrado una estrecha relación génica de las secuencias USUV derivadas del donante de sangre de Austria con las recientes secuencias austríacas y húngaras derivadas de aves, lo que sugiere que los mismos virus son capaces de infectar tanto a los animales como a los humanos. La secuencia completa de codificación austriaca derivada de un donante de sangre sano en 2017 es casi idéntica a la secuencia de Bolonia 2009 aislada de un enfermo grave con síntomas neurológicos: 10 769/10 792 identidades de nucleótidos y solo dos diferencias de aminoácidos (Asp770Asn y Lys2520Arg). Ninguno de los donantes de sangre austríacos positivos a USUV mostraron algún síntoma clínico.

Tomás Bakonyi T. et al. Usutu virus infections among blood donors, Austria, July and August 2017 – Raising awareness for diagnostic challenges. Eurosurveillance, 2017; 22 (41) DOI: 10.2807/1560-7917.ES.2017.22.41.17-00644

Bibliografía adicional

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